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Elettroporazione è diventato un metodo ampiamente utilizzato per rapidamente ed efficacemente introdurre DNA esogeno in una vasta gamma di celle. Electrotransformation è diventato il metodo di scelta per introdurre DNA in procarioti che non sono naturalmente competente.

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Per questo motivo abbiamo determinato la percentuale di batteri trasformati dividendo CFU trasformatiper il numero di CFU recuperato da "trasformazioni finti" senza plasmide da lotti altrimenti identici di cellule competenti.

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Figura 1.

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Raccolta troppo presto darà il numero di cellule insufficiente e renderà l'raschiando la piastra di agar LB frustrante, perché il "pellicule" e coli dh5a costituiscono è difficile da sollevare la superficie della piastra. Batteri Raccolta troppo tardi diminuiranno la loro competenza in modo drammatico. La finestra di tempo sarà naturalmente variare a seconda della densità dell'inoculo piastrate su piastre di E coli dh5a agar.

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I tubi microcentrifuga contenenti i batteri, cuvette e tampone devono essere pre-raffreddato e conservato in ghiaccio a tutte le ore fino a quando i batteri sono placcati. Tuttavia, ulteriori problemi possono sorgere quando la e coli dh5a DDH 2 O o CaCl 2 contengono precipitato o sono contaminati.

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Preparazione di cellule batteriche elettrocompetenti DAY 2, Pomeriggio Raccogliere i batteri con un'ansa da inoculo sterile facendo attenzione a non forare o rompere la superficie dell'agar. Una massa batterica 2 mm di diametro è e coli dh5a per una trasformazione.

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